NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT ENZYME Br512 TÁI TỔ HỢP VÀ ỨNG DỤNG SÀNG LỌC SARS-CoV-2 BẰNG KĨ THUẬT KHUẾCH ĐẠI ĐẲNG NHIỆT
DOI:
https://doi.org/10.59459/1859-1655/JMM.47Từ khóa:
SARS-CoV-2, khuếch đại đẳng nhiệt, Bst polymeraseTóm tắt
Mục tiêu: Sản xuất enzyme Br512 tái tổ hợp cho ứng dụng khuếch đại gene đích bằng công nghệ khuếch đại đẳng nhiệt qua trung gian vòng lặp (Loop-mediated isothermal amplification - LAMP) phát hiện SARS-CoV-2.
Vật liệu và phương pháp: Plasmid pKAR2-Br512 mã hóa enzyme BR512 được biến nạp vào tế bào E. coli BL21(DE3). Enzyme Br512 từ đó được biểu hiện bằng chất cảm ứng đặc hiệu (IPTG) sau đó được tinh sạch bằng phương pháp sắc kí ái lực. Đánh giá đặc tính của enzyme Br512 tự sản xuất, so sánh với enzyme Bst 3.0 (Biolab NewEngland), sử dụng phương pháp reverse transcription LAMP (RT-LAMP) phát hiện gen N của SARS-CoV-2. Thử nghiệm được tiến hành trên mẫu bệnh phẩm.
Kết quả: Br512 thu được có độ tinh sạch cao, không tạp nhiễm các protein của vi khuẩn. Phản ứng RT-LAMP sử dụng enzyme Bst 3.0 hoặc Br512 phát hiện gen N của SARS-CoV-2 với ngưỡng phát hiện lần lượt là 102 bản sao/µL và 101 bản sao/µL.
Kết luận: Biểu hiện và tinh sạch thành công enzyme Br512 và sử dụng trong xét nghiệm RT-LAMP để sàng lọc SARS-CoV-2 với ngưỡng phát hiện là 102 bản sao/µL.
Tài liệu tham khảo
WHO (2021), WHO-COVID-19-global-data.csv.pdf. 2021: https://covid19.who.int/
Baj J, et al. (2020), COVID-19: Specific and Non-Specific Clinical Manifestations and Symptoms: The Current State of Knowledge. Journal of clinical medicine, 2020, 9(6): p. 1753.
Rai P, et al. (2021), Detection technologies and recent developments in the diagnosis of COVID-19 infection. Applied microbiology and biotechnology, 2021. 105(2): p. 441-455.
Srividya A, et al. (2019), Loop Mediated Isothermal Amplification: A Promising Tool for Screening Genetic Mutations. Mol Diagn Ther, 2019. 23(6): p. 723-733.
Ma Y, et al. (2016), Enhancement of Polymerase Activity of the Large Fragment in DNA Polymerase I from Geobacillus stearothermophilus by Site-Directed Mutagenesis at the Active Site. Biomed Res Int, 2016: p. 2906484.
Oscorbin I.P, Boyarskikh U.A, Filipenko M.L (2015), Large Fragment of DNA Polymerase I from Geobacillus sp. 777: Cloning and Comparison with DNA Polymerases I in Practical Applications. Mol Biotechnol, 2015. 57(10): p. 947-59.
7. Maranhao A, et al. (2020), An improved and readily available version of Bst DNA Polymerase for LAMP, and applications to COVID-19 diagnostics. medRxiv, 2020.
Dvorak P, et al. (2015), Exacerbation of substrate toxicity by IPTG in Escherichia coli BL21(DE3) carrying a synthetic metabolic pathway. Microbial Cell Factories, 2015. 14(1): p. 201.
Nurjayadi M, et al. (2019), Variations of binding, washing, and concentration of imidazole on purification of recombinant Fim-C Protein Salmonella typhi with Ni-NTA Resin. Journal of Physics: Conference Series, 2019. 1402(5).
Tải xuống
Đã Xuất bản
Cách trích dẫn
Số
Chuyên mục
Ngày xuất bản 28-04-2023
